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蛋白质组学和代谢组学 定量蛋白质组学 TMT

TMT 案例解读 留言咨询


    标记定量技术是目前差异蛋白质定量分析方法中通量最高,系统误差最小,功能最强大的分析方法之一。TMT™(Tandem Mass Tag™)是由美国Thermo Scientific公司研发的一种体外标记技术,可做到10个样品(10plex)同时标记分析。两种标记试剂原理类似,可根据实际样本数量随意选择。


    技术原理:TMT试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和肽反应基团。报告基团有10种分子量,范围从126到131Da;平衡基团也有10种不同的分子量,与不同的报告基团搭配,能保证被标记的不同来源的同一肽段在一级质谱中具有相同的质荷比;肽反应基团能与肽段N端及赖氨酸侧链氨基发生共价连接使肽段连上标记。

    一级质谱中,不同样品中的同一肽段表现出相同的质荷比;二级质谱中,化学键断裂释放出报告离子,在质谱低质量区产生了10个报告离子峰,其强度反应了该肽段在不同样品中的相对表达量信息,另外二级质谱中的肽段碎片离子峰质荷比反应了该肽段的序列信息。这些质谱原始数据经过数据库检索,可得到蛋白质的定性和相对定量信息。




适用范围

   1) 机理和调控机制研究 

   2) 动态过程中机制研究 

   3) 疾病标志物的筛选 

   4) 用药及预后标志物筛选


技术优势

   1) 高通量:可同时对2-10组样本进行分析;② 高重复性:样本混合上机,消除了系统误差;

   2) 体外标记技术,适用于大部分生物样本的蛋白质差异分析:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;

   3) 分离能力强,分析范围广,可对任何类型的蛋白质进行分离鉴定,包括高分子量、酸性和碱性蛋白等。



实验流程


生信分析



送样要求


样品类型

样品要求(/组样品)

备注

蛋白质溶液

蛋白质总量≥300µg

重复实验则量翻倍,建议准备两份样品备用。

组织样品

样品总量≥0.1g

按照蛋白质组织提取效率(蛋白:组织=7%) 按照蛋白质组织提取效率(蛋白:组织=7%)

细胞样品

细胞数量≥107个

胰酶消化,按细胞冻存标准离心收集细胞即可。

体液样品

血清≥200µL,脑脊液≥200µL,尿液≥1mL ,泪液≥1mL.




TMT蛋白质组学研究认知功能下降的突触标记神经退行性疾病



主要结果:




 

 

参考文献:

Erika Bereczki, Rui M。 Branca, Paul T。 Francis, et al。, Synaptic markers of cognitive decline in neurodegenerative diseases: a proteomic approach。 Brain 2018: 141; 582–595。 doi:10。1093/brain/awx352


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